خدمات توالی یابی

 تعیین توالی (سکانس) به روش Sanger sequencing

بخش سکانس مرکز ژنتیک با بهره‌گیری از فناوری Sanger  فعالیت می‌کند که یکی از معتبرترین و دقیق‌ترین روش‌های تعیین توالی DNA در جهان است. این روش که به عنوان روش کلاسیک سکانسینگ شناخته می‌شود، هنوز هم در بسیاری از مراکز تحقیقاتی و تشخیصی به‌عنوان استاندارد طلایی (Gold Standard) برای بررسی جهش‌های ژنتیکی به کار می‌رود.

مراحل انجام سکانس سنگر

فرآیند سکانس در این بخش شامل چند مرحله دقیق و کنترل‌شده است:

1.استخراج DNA از نمونه زیستی

  ابتدا DNA از نمونه‌هایی مانند خون، بافت یا سلول استخراج و خالص‌سازی می‌شود. کیفیت بالای DNA برای دقت نتایج اهمیت زیادی دارد.

2.تکثیر ناحیه هدف با PCR

ژن یا بخشی از DNA که قرار است بررسی شود، با استفاده از واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) تکثیر می‌گردد.

  3.واکنش سکانس(Cycle Sequencing)
در این مرحله مخلوطی شامل پرایمر اختصاصی، نوکلئوتیدهای معمولی و نوکلئوتیدهای نشاندار فلورسنت استفاده می‌شود. اضافه شدن تصادفی نوکلئوتیدهای فلورسنت باعث توقف رشد زنجیره در نقاط مختلف توالی می‌شود.

  4.الکتروفورز و خواندن توالی
محصولات حاصل در دستگاه سکانسر بارگذاری شده و دستگاه با خواندن رنگ‌های فلورسنت، توالی دقیق بازهای DNA را مشخص می‌کند.

5.تحلیل داده‌ها

  داده‌های خام توسط نرم‌افزار تخصصی تحلیل شده و نمودار (Chromatogram) حاصل برای شناسایی تغییرات ژنتیکی بررسی می‌شود.

کاربردهای روش Sanger

روش سنگر به دلیل دقت بالا و قابلیت اطمینان، در حوزه‌های متعددی مورد استفاده قرار می‌گیرد:

تأیید جهش‌های ژنتیکی در بیماران

کنترل کیفیت (Validation) نتایج حاصل از سایر روش‌های مولکولی

  بررسی توالی ژن‌های خاص در پروژه‌های تحقیقاتی

شناسایی میکروارگانیسم‌ها از طریق توالی ژن‌های ریبوزومی(مثل 16S rRNA)

تیمی از کارشناسان زیست ‌مولکولی و ژنتیک با استفاده از دستگاه Sanger Sequencer مدل ABI3500 .Classic116 و نرم‌افزارهای تحلیلی تخصصی، فرآیند سکانس را با دقت بالا انجام می‌دهند. تمام مراحل از استخراج تا تحلیل نهایی تحت کنترل کیفیت دقیق صورت می‌گیرد تا نتایج با بیشترین صحت و تکرارپذیری ارائه شوند.